ワンワールドワンファイト
─COVID-19パンデミック・チャレンジに対応する共通の運命のグローバルコミュニティを構築するための国際協力
世界中を席巻する新しいコロナウイルスは、進行中の世界的なCOVID-19パンデミック危機をもたらしました。新しいコロナウイルスには国境がなく、COVID-19とのこの戦いから免れる国はありません。この世界的なCOVID-19の大流行に対応して、Liming Bio-Products Corpは、私たちのグローバルコミュニティの幸福をサポートするために貢献しています。
私たちの世界は現在、新しいコロナウイルス病2019（COVID-19）のパンデミックの前例のない影響に直面しています。今日まで、この病気の治療に利用できる効果的な薬はありません。しかし、COVID-19を検出するために多くの診断テストが開発されています。これらのテストは、新規のコロナウイルス特異的核酸または抗体バイオマーカーを検出するための分子的または血清学的方法に基づいています。COVID-19がパンデミック状態に達したため、新しいコロナウイルス感染の早期診断は、ウイルスの拡散を評価して封じ込める上で重要ですが、普遍的な使用のための完璧なテストはまだ存在しません。COVID-19感染のスクリーニング、診断、モニタリングにどのような検査が使用される可能性があるのか、そしてそれらの限界は何かを知る必要があります。これらの科学的ツールをより有効に活用し、この急速に蔓延する深刻な病気の出現を特定して制御するのに役立つ方法は非常に重要です。
新規コロナウイルスの検出の目的は、COVID-19に感染している個人か、ウイルスを静かに広める可能性のある漸近的保菌者かを判断し、臨床治療の意思決定を導くための重要な情報を提供することです。以前の研究では、臨床的決定の70％が検査結果に依存していることが示されています。異なる検出方法を使用する場合、検出試薬キットの要件も異なります。
図1
図1：COVID-19感染の典型的な時間経過中の一般的なバイオマーカーレベルの主要な段階を示す図。X軸は感染日数を示し、Y軸はウイルス量、抗原の濃度、およびさまざまな期間の抗体の濃度を示します。抗体とは、IgMおよびIgG抗体を指します。RT-PCRと抗原検出の両方を使用して、新規コロナウイルスの有無を検出します。これは、患者の早期検出の直接的な証拠です。ウイルス感染から1週間以内に、PCR検出または抗原検出が推奨されます。新規コロナウイルス感染後約7日間、患者の血液中の新規コロナウイルスに対するIgM抗体は徐々に増加しますが、存在期間は短く、その濃度は急速に低下します。対照的に、ウイルスに対するIgG抗体は、ウイルス感染後、通常は約14日後に出現します。IgG濃度は徐々に上昇し、血中で長期間持続します。したがって、IgMが患者の血液で検出された場合、それはウイルスが最近感染したことを意味し、これは初期感染マーカーです。患者の血液中にIgG抗体が検出された場合、それはウイルス感染がしばらくの間続いていることを意味します。後期感染または前感染とも呼ばれます。回復期の患者さんによく見られます。
新規コロナウイルスのバイオマーカー
新規コロナウイルスは、タンパク質と核酸で構成されるRNAウイルスです。ウイルスは宿主（ヒト）体に侵入し、受容体ACE2に対応する結合部位を介して細胞に入り、宿主細胞内で複製し、ヒト免疫系を外来の侵入者に応答させ、特異的抗体を産生させます。したがって、バイアルの核酸と抗原、および新規コロナウイルスに対する特異的抗体は、理論的には、新規コロナウイルスを検出するための特異的バイオマーカーとして使用することができます。核酸検出では、RT-PCRテクノロジーが最も一般的に使用されますが、血清学的方法は、新規コロナウイルス特異的抗体の検出に一般的に使用されます。現在、COVID-19感染をテストするために選択できるさまざまなテスト方法があります[1]。
新規コロナウイルスの主な試験方法の基本原理
COVID_19の多くの診断テストがこれまでに利用可能であり、より多くのテストキットが毎日緊急使用許可の下で承認を受けています。新しいテストの開発には非常に多くの異なる名前と形式がありますが、現在のCOVID_19テストはすべて、基本的に2つの主要なテクノロジーに依存しています。ウイルスRNAの核酸検出と、ウイルス特異的抗体（IgMおよびIgG）を検出する血清学的免疫アッセイです。
01.核酸の検出
逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）、ループ媒介等温増幅（LAMP）、および次世代シーケンシング（NGS）は、新規コロナウイルスRNAを検出するための一般的な核酸法です。RT-PCRは、COVID-19の最初のタイプの検査であり、世界保健機関（WHO）と米国疾病予防管理センター（CDC）の両方によって推奨されています。
02.血清学的抗体検出
抗体は、ウイルス感染に反応して人体で産生される保護タンパク質です。IgMは初期型の抗体ですが、IgGは後期型の抗体です。血清または血漿サンプルは通常、COVID-19感染の急性期および回復期を評価するために、抗体の特定のIgMおよびIgGタイプの存在について検査されます。これらの抗体ベースの検出方法には、コロイド金免疫クロマトグラフィーアッセイ、ラテックスまたは蛍光ミクロスフェア免疫クロマトグラフィー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）、および化学発光アッセイが含まれます。
03.ウイルス抗原の検出
抗原は、人体によって認識されるウイルスの構造であり、免疫防御システムをトリガーして、血液や組織からウイルスを取り除く抗体を生成します。ウイルスに存在するウイルス抗原は、イムノアッセイを使用して標的化および検出することができます。ウイルスRNAと同様に、ウイルス抗原も感染者の気道に存在し、COVID-19感染の急性期を診断するために使用できます。したがって、初期抗原検査のために、唾液、鼻咽頭および中咽頭スワブ、深部咳喀痰、気管支肺胞洗浄液（BALF）などの上気道検体を収集することがしばしば推奨されます。
新規コロナウイルスの検査方法の選択
試験方法の選択には、臨床設定、試験品質管理、所要時間、試験コスト、サンプリング収集方法、検査室要員の技術要件、施設および機器の要件など、多くの要素が含まれます。核酸またはウイルス抗原の検出は、ウイルスの存在の直接的な証拠を提供し、新しいコロナウイルス感染の診断を確認することです。抗原検出には多くの方法がありますが、新規コロナウイルスの検出感度は、RT-PCR増幅の検出感度よりも理論的に低くなっています。抗体検査は、人体で産生された抗ウイルス抗体の検出であり、時間的に遅れており、ウイルス感染の急性期の早期検出には使用できないことがよくあります。検出アプリケーションの臨床設定はさまざまであり、サンプル収集サイトも異なる場合があります。ウイルスの核酸と抗原を検出するには、鼻咽頭スワブ、口腔咽頭スワブ、喀痰、気管支肺胞洗浄液（BALF）など、ウイルスが存在する気道に検体を採取する必要があります。抗体ベースの検出では、血液検体を収集し、特定の抗ウイルス抗体（IgM / IgG）の存在を調べる必要があります。ただし、抗体検査と核酸検査の結果は互いに補完し合う可能性があります。たとえば、検査結果が核酸陰性、IgM陰性であるが、IgG陽性である場合、これらの結果は、患者が現在ウイルスを持っていないが、新しいコロナウイルス感染から回復したことを示します。[2]
新規コロナウイルス検査の長所と短所
新規コロナウイルス肺炎の診断および治療プロトコル（試験版7）（2020年3月3日に国家保健委員会および国家中医薬管理局によりリリース）では、核酸検査が新規の診断のゴールドスタンダード法として使用されています。コロナウイルス感染症、抗体検査も診断の確認方法の一つと考えられています。
病原性および血清学的所見
（1）病原性所見：RT-PCRおよび/またはNGS法を使用して、鼻咽頭スワブ、喀痰、下気道分泌物、血液、糞便、およびその他の検体から新規コロナウイルス核酸を検出できます。検体が下気道（喀痰または気道抽出）から得られた場合、より正確になります。検体は採取後できるだけ早く検査に提出する必要があります。
（2）血清学的所見：NCPウイルス特異的IgMは、発症後約3〜5日で検出可能になります。IgGは、急性期と比較して回復期に少なくとも4倍の滴定に達します。
ただし、検査方法の選択は、地理的な場所、医療規制、および臨床設定によって異なります。米国では、NIHがコロナウイルス病2019（COVID-19）治療ガイドライン（サイト更新：2020年4月21日）を発行し、FDAが公衆衛生緊急事態（2020年3月16日に発行）中にコロナウイルス病の診断テストに関するポリシー-2019を発行しました。 ）、IgM/IgG抗体の血清学的検査はスクリーニング検査としてのみ選択されました。
核酸検出法
RT_PCRは、新しいコロナウイルスRNAが呼吸器または他の検体に存在するかどうかを検出するために設計された高感度の核酸検査です。PCRテストの結果が陽性であるということは、COVID-19感染を確認するためのサンプルに新規のコロナウイルスRNAが存在することを意味します。PCR検査結果が陰性であるからといって、ウイルス感染がないことを意味するわけではありません。サンプルの質の悪さや回復期の病気の時点などの影響を受ける可能性があるからです。RT-PCRは高感度の検査ですが、いくつかの欠点があります。RT-PCRテストは、サンプルの高品質に大きく依存し、手間と時間がかかる可能性があります。ウイルスRNAの量は、患者によって大きく異なるだけでなく、サンプルが収集された時点や感染段階、または臨床症状の発症によっても同じ患者内で異なる可能性があるため、これは困難な場合があります。新規コロナウイルスを検出するには、十分な量のインタクトなウイルスRNAを含む高品質の検体が必要です。
RT-PCR検査では、COVID-19に感染している一部の患者に対して、誤った陰性結果（偽陰性）が生じる可能性があります。ご存知のように、新しいコロナウイルスの主な感染部位は、肺と肺胞や気管支などの下気道にあります。したがって、深咳または気管支肺胞洗浄液（BALF）からの喀痰検体は、ウイルス検出の感度が最も高いと考えられています。ただし、臨床診療では、鼻咽頭または中咽頭スワブを使用して上気道からサンプルを収集することがよくあります。これらの検体を採取することは、患者にとって不快であるだけでなく、特別な訓練を受けた人員を必要とします。サンプリングを低侵襲または容易にするために、場合によっては、患者に口腔スワブを与え、頬粘膜または舌スワブからサンプルを採取できるようにすることがあります。十分なウイルスRNAがないと、RT-qPCRは偽陰性のテスト結果を返す可能性があります。中国の湖北省では、最初の検出でのRT-PCR感度は約30％〜50％と報告されており、平均で40％でした。偽陰性の割合が高いのは、サンプリングが不十分なことが原因である可能性が最も高いです。
さらに、RT-PCRテストでは、複雑なRNA抽出ステップとPCR増幅手順を実行するために高度な訓練を受けた担当者が必要です。また、より高いレベルのバイオセーフティ保護、特別な実験施設、およびリアルタイムPCR装置が必要です。中国では、COVID-19検出のためのRT-PCRテストは、バイオセーフティーレベル3（BSL-3）の実践を使用して人員を保護しながら、バイオセーフティーレベル2の研究所（BSL-2）で実施する必要があります。これらの要件の下で、2020年1月の初めから2月の初めまで、中国武漢のCDC研究所の能力は、1日あたり数百の症例しか検出できませんでした。通常、これは他の感染症をテストするときに問題にはなりません。しかし、COVID-19のような世界的な大流行に対処する場合、潜在的に数百万人が検査される可能性があるため、RT-PCRは、特別な実験施設や技術機器が必要となるため、重大な問題になります。これらの不利な点は、スクリーニングのための効率的なツールとして使用されるRT-PCRを制限する可能性があり、また、テスト結果のレポートの遅延につながる可能性があります。
血清学的抗体検出法
病気の経過、特に中期および後期の進行に伴い、抗体の検出率は非常に高くなります。武漢中央南病院での研究では、COVID-19感染の3週目に抗体検出率が90％以上に達する可能性があることが示されました。また、抗体は、新しいコロナウイルスに対するヒトの免疫応答の産物です。抗体検査には、RT-PCRに比べていくつかの利点があります。第一に、血清学的抗体検査は簡単かつ迅速です。抗体のイムノクロマトグラフィーをポイントオブケアに使用して、15分で結果を出すことができます。第二に、血清学的検査で検出される標的は抗体であり、ウイルスRNAよりもはるかに安定していることが知られています。収集、輸送、保管、および検査中、抗体検査用の検体は、一般的にRT-PCR用の検体よりも安定しています。第三に、抗体は血液循環に均一に分布しているため、核酸検査と比較してサンプリングのばらつきが少なくなります。抗体検査に必要なサンプル量は比較的少ないです。たとえば、抗体のイムノクロマトグラフィーで使用するには、10マイクロリットルの指刺し血液で十分です。
一般に、抗体検査は、疾患経過中の新規コロナウイルスの検出率を改善するための核酸検出の補足ツールとして選択されます。抗体検査を核酸検査と併用すると、偽陽性および偽陰性の結果が減少する可能性があるため、COVID19の診断の分析精度が向上する可能性があります。現在の操作ガイドでは、2種類のテストを個別の検出形式として個別に使用することは推奨されていませんが、組み合わせた形式として使用する必要があります。[2]
図2：新規コロナウイルス感染を検出するための核酸および抗体検査結果の正しい解釈
図3：Liming Bio-Products Co.、Ltd. –新規コロナウイルスIgM / IgG抗体デュアルラピッドテストキット（StrongStep®SARS-CoV-2 IgM / IgG抗体迅速検査、ラテックス免疫クロマトグラフィー）
図4：Liming Bio-Products Co.、Ltd. –StrongStep®新規コロナウイルス（SARS-CoV-2）マルチプレックスリアルタイムPCRキット（3つの遺伝子の検出、蛍光プローブ法）。
ノート：この高感度ですぐに使用できるPCRキットは、長期保存用に凍結乾燥フォーマット（凍結乾燥プロセス）で入手できます。キットは室温で輸送および保管でき、1年間安定です。プレミックスの各チューブには、逆転写酵素、Taqポリメラーゼ、プライマー、プローブ、dNTP基質など、PCR増幅に必要なすべての試薬が含まれています。ユーザーは、テンプレートと一緒にPCRグレードの水を追加してミックスを再構成し、ロードすることができます。 PCR装置に増幅を実行します。
Liming Bio-Products Co.、Ltd.は、新たなコロナウイルスの発生に対応して、臨床および公衆衛生研究所がCOVID-19感染を迅速に診断できるようにする2つの診断キットの開発に迅速に取り組んできました。これらのキットは、新しいコロナウイルスの発生が急速に拡大している国や地域での大規模なスクリーニングや、COVID-19感染の診断と確認に非常に適しています。これらのキットは、事前通知された緊急使用許可（PEUA）の下でのみ使用するためのものです。試験は、国または地方自治体の規制の下で認定された研究所に限定されています。
抗原検出法
1.ウイルス抗原検出は、核酸検出と同じ直接検出のカテゴリーに分類されます。これらの直接検出方法は、検体中のウイルス性病原体の証拠を探し、確認診断に使用できます。しかし、抗原検出キットの開発には、病原性ウイルスを認識して捕捉できる強力な親和性と高感度を備えた高品質のモノクローナル抗体が必要です。抗原検出キットの調製に適したモノクローナル抗体を選択して最適化するには、通常6か月以上かかります。
2.現在、新規コロナウイルスを直接検出するための試薬は、まだ研究開発段階にあります。したがって、抗原検出キットは臨床的に検証されておらず、市販されていません。深センの診断会社が抗原検出キットを開発し、スペインで臨床試験を行ったことが以前に報告されましたが、試薬の品質の問題があるため、アッセイの信頼性と精度を検証できませんでした。現在まで、NMPA（旧中国FDA）は、臨床使用のための抗原検出キットをまだ承認していません。結論として、さまざまな検出方法が開発されました。それぞれの方法には利点と制限があります。さまざまな方法の結果を検証と補完に使用できます。
3.高品質のCOVID-19テストキットの作成は、研究開発中の最適化に大きく依存します。Liming Bio-Product Co.、Ltd。テストキットは、最高レベルのパフォーマンスと一貫性を提供するために、厳格な製造および品質管理基準を満たす必要があります。Liming Bio-Product Co.、Ltd.の科学者は、分析定量で最高レベルのパフォーマンスを確保するために、in vitro診断キットの設計、テスト、および最適化に20年以上の経験があります。
COVID-19パンデミックの間、中国政府は国際的なホットスポットでのエピデミック予防材料に対する巨大な需要の急増に直面しました。4月5日、国家評議会合同予防管理メカニズム「医療材料の品質管理の強化と市場秩序の規制」の記者会見で、同省の外国貿易局の第一級検査官である江ファン商務省は、「次に、国際社会が必要とするより多くの医薬品のサポートをスピードアップすることと、製品の品質管理、規制、および管理を改善することの2つの側面に注力します。世界的な流行に共同で対応し、人類の未来を共有するコミュニティの構築に中国が貢献していきます。
図5：Liming Bio-Products Co.、Ltd。の新しいコロナウイルス試薬がEUCE登録証明書を取得しました
名誉証明書
ホウシェンシャン
図6.LimingBio-Products Co.、Ltd.は、武漢バルカン（HouShenShan）Mountain HospitalがCOVID-19の流行と戦うことを支援し、武漢赤十字の名誉証明書を授与されました。武漢バルカン山岳病院は、中国で最も有名な病院であり、重症のCOVID-19人の患者の治療を専門としています。
新たなコロナウイルスの発生が世界中に広がり続ける中、南京石灰バイオプロダクツ株式会社は、この前例のない世界的な脅威と戦うための革新的な技術で世界中のコミュニティを支援し、支援するために強化しています。COVID-19感染の迅速なテストは、この脅威に対処するための重要な部分です。私たちは、人々が必要な重要な検査結果を受け取ることができるように、最前線の医療従事者の手に高品質の診断プラットフォームを提供することにより、重要な方法で貢献し続けています。Liming Bio-products Co.、Ltd.のCOVID-19パンデミックとの闘いにおける取り組みは、私たちの技術、経験、専門知識を国際社会に貢献し、運命のグローバルコミュニティを構築することです。
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投稿時間：2020年5月1日
